傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過(guò)度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

小鼠附睪脂肪干細(xì)胞（永生化）

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無(wú)菌，且須在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來(lái)源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用。可根據(jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過(guò)短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過(guò)小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過(guò)大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴螅瑧?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過(guò)程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

CLIAKitforCryBeta(HumancrystalproteinsBeta)ELISAKit人晶體蛋白β規(guī)格：48T/96T

RatEpidermalgrowthfactor,EGFELISAKit 大鼠表皮生長(zhǎng)因子(EGF)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

細(xì)胞腺苷酸激酶(Adenylatekinase)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Ratdeoxypyridinoline,DPDELISAKit大鼠脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子23(FGF23)ELISA試劑盒 ，英文名： FGF23 ELISA Kit

偏肺病毒(hMPV)檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T

HumaeceptorⅢfoheFcregionofimmunoglobulinG,FcγRⅢELISA試劑盒人GFc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

ELISAKitFA小鼠規(guī)格：48T/96T

HumancicaicialPemphigoid,CPELISAKit人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

人強(qiáng)啡肽(Dyn)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人腺病毒3(ADV3)抗體(IgG)免疫試劑盒 Human ADV3 IgG ELISA Kit

二(MDA)測(cè)試盒 可見(jiàn)分光光度法 50管/48樣

RatMotilin,MTLELISA試劑盒大鼠胃動(dòng)素(MTL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanHepatitisCvirusIgM,HCV-IgMELISA試劑盒人型肝炎IgM(HCV-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanL-SelectinELISAKit人L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

腫瘤壞死因子配體超家族成員12A（CD266）抗體

骨形態(tài)發(fā)生蛋白11抗體

溶質(zhì)載體家族蛋白7成員2抗體

MOSC1蛋白抗體

酰基脫氫酶中鏈抗體

白細(xì)胞F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體

磷酸化KB抑制蛋白激酶α抗體

CD5抗體

小鼠附睪脂肪干細(xì)胞（永生化）血小板白細(xì)胞C激酶底物同源結(jié)構(gòu)域M2抗體