產(chǎn)品背景：

骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4（BMP-4）的分子質(zhì)量為 13 kDa，是一種重要的調(diào)節(jié)分子，在整個人類發(fā)育過程中對中胚層誘導(dǎo)、牙齒發(fā)育、肢體形成、骨誘導(dǎo)和骨折修復(fù)起著重要作用。BMP-4 是胚胎早期分化和建立背-腹軸所需的關(guān)鍵信號分子。BMP-4 由脊索背側(cè)部分分泌，它與聲刺猬協(xié)同作用，為后期結(jié)構(gòu)的分化建立背-腹軸。

產(chǎn)品特點：

更簡單：無需抗原抗體反應(yīng)，基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測方法簡單高效，反應(yīng)僅需要幾分鐘。

更靈敏：無需抗體，檢測染料僅BrdU抗體的1/500，很容易擴散，即便是單個增殖細(xì)胞也能準(zhǔn)確檢測。

更快速：無需過夜，省卻了抗原抗體反應(yīng)的復(fù)雜繁瑣步驟，完成整個檢測周期僅需2.5小時。

更準(zhǔn)確：無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細(xì)胞核邊緣清晰完整。

更兼容：對樣品幾乎無損傷，更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標(biāo)記，能夠同時檢測細(xì)胞其他性狀特征

實驗步驟：

1.細(xì)胞培養(yǎng)

（以6孔板為參考，其他培養(yǎng)孔可根據(jù)實驗需要進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。）每孔1x10^5-3x10^6細(xì)胞接種于6孔板中，培養(yǎng)至正常生長階段。

注：細(xì)胞接種量，可根據(jù)細(xì)胞大小、生長速度、以及實驗處理周期等調(diào)整。

2.細(xì)胞干預(yù)或者處理

（選做）可以根據(jù)實驗需要對細(xì)胞進(jìn)行藥物或者其他刺激干預(yù)處理。

3.細(xì)胞共孵育培養(yǎng)

根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，用細(xì)胞培養(yǎng)基按比例稀釋溶液，或者按比例在孔板培養(yǎng)液中加入適量的溶液與細(xì)胞共同孵育，同時設(shè)置不添加組作為陰性對照組。每孔加入配制的稀釋后的培養(yǎng)液共同孵育2h，去除舊培養(yǎng)液。

注意事項：

1.由于使用96孔板進(jìn)行檢測，如果你的細(xì)胞要養(yǎng)48 h或更長，建議不要吝嗇96-孔板的四周邊孔，這32個邊孔不能使用，建議加入滅菌PBS以飽和中間64個孔的水分。因為細(xì)胞培養(yǎng)過程中，邊孔的水分蒸發(fā)很快，培養(yǎng)液及里面的藥物會出現(xiàn)濃縮現(xiàn)象，細(xì)胞的狀況就復(fù)雜了。

2.溶劑在低溫情況下會凝固，使用前請室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

3.一般4oC避光保存兩周內(nèi)有效，保存在-20度長期保存，避免反復(fù)凍融，小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解，尤其當(dāng)變?yōu)榛揖G色時就不能再用了。

4.Formazan溶解液結(jié)凍或產(chǎn)生沉淀時可以37℃水浴孵育以促進(jìn)溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。

5.孵育時，須避光。

6.有致癌性，用的時候小心，有條件帶那種透明的簿膜手套。配成的需要無菌，對菌很敏感。

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