型 號
產(chǎn)品時間2025-10-23
所屬分類脂肪酸代謝系列
報價2450
商品屬性：
產(chǎn)品名稱：淀粉磷酸化酶(SP)生化檢測試劑盒
規(guī)格：100管/96樣
貨號 : EY-01S1213
測試方法:微量法
分類：脂肪酸代謝系列
商品詳情：
測定意義：
淀粉磷酸化酶（Starch Phosphorylase，SP）是淀粉代謝過程的可逆反應(yīng)酶，既可催化淀粉的合成，也可催化淀粉的分解。
在高等植物中，淀粉磷酸化酶（合成方向）主要存在于質(zhì)體中，負(fù)責(zé)延長淀粉的 α-1,4-糖鏈的非還原末端；淀粉磷酸化酶（分解方向）主要存在于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中，催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵磷酸解產(chǎn)生糖-1-磷酸，負(fù)責(zé)糖鏈的磷酸解，是淀粉代謝過程中的關(guān)鍵酶。
在植物體中，淀粉磷酸化酶分解方向的底物無機(jī)磷濃度比合成方向的底物糖-1-磷酸濃度幾乎高了兩個數(shù)量級，一般認(rèn)為淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解，因此，分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要測定意義。
測定原理：
淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵與無機(jī)磷反應(yīng)產(chǎn)生糖-1-磷酸，糖-1-磷酸在磷酸糖變位酶的作用下產(chǎn)生糖-6-磷酸，并在6-磷酸糖脫氫酶催化下還原NADP+產(chǎn)生NADPH，使340nm下吸光值增加。
需自備的儀器和用品：
酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提取：
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。
2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；16000g， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測。
3、血清等液體：直接測定。
ADH測定操作：
1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A1和A2。△A測定管=A1-A2。
測定步驟：
1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、將試劑二在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
3、操作表：
試劑名稱（μL） | 測定孔 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 760 |
試劑三 | 10 |
試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2。
注意：若A1-A2大于0.5，需將樣本用提取液稀釋，使A1-A2小于0.5，可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
NAD-MDH活力單位的計算：
1、血清（漿）NAD-MDH活力的計算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，8×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；2000：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，2000萬。
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